Research Article

Evaluation of a newly developed rapid ELISA to detect anti-Ehrlichia canis antibodies in dogs

Évaluation d’un nouveau test ELISA rapide pour la détection des anticorps anti-Ehrlichia canis chez le chien

¹ Agrolabo S.p.A., 10010 Scarmagno, Italy
² Department of Veterinary Medicine and Animal Sciences, University of Milan, 26900 Lodi, Italy

^* Corresponding author: This email address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it.

Received: 22 April 2025
Accepted: 1 September 2025

Abstract

Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is a globally prevalent disease with zoonotic potential primarily caused by the obligate intracellular bacterium Ehrlichia canis, transmitted by the ticks Rhipicephalus spp. to vertebrate hosts. In dogs, CME affects immune system cells, leading to subclinical infection or acute and chronic disease forms that impact multiple organs and potentially result in death if diagnosis is delayed. Diagnosis of canine ehrlichiosis is complex, typically involving cytology, polymerase chain reaction), and serological assays such as the indirect immunofluorescence antibody test (IFAT), considered the gold standard, and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Herein, we introduce EhrlichiaCHECK Ab ELISA, a novel rapid indirect ELISA for detecting anti-E. canis antibodies in canine serum or plasma samples. The assay’s performance was validated using 112 canine samples (61 negative, 51 positive). Compared to IFAT, the ELISA exhibited high sensitivity (96.1%, 95% confidence interval [CI]: 85.4%–99.3%) and specificity (95.1%, 95% CI: 85.4%–98.7%). Furthermore, in comparison to the widely used commercial INgezim Ehrlichia ELISA (Gold Standard Diagnostics), EhrlichiaCHECK Ab ELISA demonstrated 98.0% agreement and enhanced specificity attributed to a more specific antigen, corroborated by bioinformatics analysis. The assay also demonstrated accuracy, with low percentage values of intra- and inter-assay coefficients of variation. In conclusion, our data suggest that the newly developed assay is a valuable tool for diagnosing E. canis infections in dogs.

Résumé

L’ehrlichiose monocytaire canine (EMC) est une maladie mondialement répandue à potentiel zoonotique, principalement causée par la bactérie intracellulaire obligatoire Ehrlichia canis, transmise par les tiques Rhipicephalus spp. aux hôtes vertébrés. Chez le chien, l’EMC affecte les cellules du système immunitaire, entraînant une infection subclinique ou des formes aiguës et chroniques de la maladie affectant plusieurs organes et potentiellement mortelles en cas de diagnostic tardif. Le diagnostic de l’ehrlichiose canine est complexe et implique généralement la cytologie, la réaction en chaîne par polymérase (PCR) et des tests sérologiques tels que le test d’immunofluorescence indirecte (IFAT), considéré comme la référence, et le test d’immuno-absorption enzymatique (ELISA). Nous présentons ici EhrlichiaCHECK Ab ELISA, un nouveau test ELISA indirect rapide pour la détection des anticorps anti-E. canis dans des échantillons de sérum ou de plasma canin. Les performances du test ont été validées à l’aide de 112 échantillons canins (61 négatifs, 51 positifs). Comparé à l’IFAT, l’ELISA a montré une sensibilité (96,1 %, intervalle de confiance à 95 % [IC] : 85,4 %–99,3 %) et une spécificité (95,1 %, IC à 95 % : 5,4 %–98,7 %) élevées. De plus, par rapport au test ELISA commercial INgezim Ehrlichia largement utilisé (Gold Standard Diagnostics), l’ELISA EhrlichiaCHECK Ab a démontré une concordance de 98,0 % et une spécificité améliorée attribuée à un antigène plus spécifique, corroboré par une analyse bioinformatique. Le test a également fait preuve de précision, avec de faibles valeurs en pourcentage des coefficients de variation intra- et inter-tests. En conclusion, nos données suggèrent que le test nouvellement développé est un outil précieux pour le diagnostic des infections à E. canis chez les chiens.