Research Article

Evaluation of the inflammatory response to Kudoa septempunctata genotype ST3 isolated from olive flounder (Paralichthys olivaceus) in Caco-2 cells

Évaluation dans des cellules Caco-2 de la réponse inflammatoire à Kudoa septempunctata génotype ST3 isolé du cardeau hirame (Paralichthys olivaceus)

¹ College of Veterinary Medicine and Veterinary Medical Research Institute, Jeju National University, Jeju 63243, Republic of Korea
² It’s Hanbul Co., Ltd. Research Institute 4, Nonhyeon-dong 249, Gangnam-gu, Seoul 06101, Republic of Korea
³ Ocean and Fisheries Research Institute, Jeju Special Self-Governing Province, Pyoseon-myeon, Segwipo-si, Jeju 63629, Republic of Korea

^* Corresponding author: shint@jejunu.ac.kr

Received: 10 January 2018
Accepted: 24 February 2018

Abstract

Kudoa septempunctata (Myxosporea, Multivalvulida) is a parasite of the trunk muscle of cultured olive flounder (Paralichthys olivaceus). We investigated whether K. septempunctata genotype ST3 spores induce cell damage and the secretion of inflammatory mediators in Caco-2 cells, which exhibit characteristics similar to human intestinal epithelial cells. Purified K. septempunctata spores were heated at 95 °C for 5 min. Lactate dehydrogenase (LDH) release was measured to determine the efficacy of denaturation. Naïve and heated spores, lipopolysaccharide (positive control) and vehicle (negative control) were added to Caco-2 cells. Cells were subjected to the cytotoxic LDH assay and western blot analysis to examine the expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase (COX)-2. Supernatants were collected to measure nitric oxide (NO) and prostaglandin E2 (PGE₂). Most spores were denaturated by heating, and the spore morphology was found to be wrinkled with shell valves and polar capsules. In addition, cytotoxicity and inflammatory mediators, such as NO, PGE₂, iNOS, and COX-2, remained unchanged in Caco-2 cells following exposure to naïve and heated spores compared with the positive controls. Collectively, the findings of this study imply that spores of K. septempunctata genotype ST3 do not cause inflammation in Caco-2 cells.

Résumé

Kudoa septempunctata (Myxosporea, Multivalvulida) est un parasite des muscles du cardeau hirame cultivé (Paralichthys olivaceus). Nous avons étudié si les spores du génotype ST3 de K. septempunctata induisent des lésions cellulaires et la sécrétion de médiateurs inflammatoires dans les cellules Caco-2, qui présentent des caractéristiques similaires aux cellules épithéliales intestinales humaines. Les spores de K. septempunctata purifiées ont été chauffées à 95 ° C pendant 5 min. La libération de lactate déshydrogénase (LDH) a été mesurée pour déterminer l’efficacité de la dénaturation. Des spores naïves et chauffées, ainsi que des lipopolysaccharides (témoins positifs) et un véhicule (témoin négatif) ont été ajoutés aux cellules Caco-2. Les cellules ont été soumises à l’analyse de la LDH cytotoxique et à un western blot pour examiner l’expression de l’oxyde nitrique synthase inductible (iNOS) et de la cyclooxygénase (COX)-2. Les surnageants ont été recueillis pour mesurer l’oxyde nitrique (NO) et la prostaglandine E2 (PGE2). La plupart des spores étaient dénaturées par le chauffage, et la morphologie des spores était ridée avec des valves de coquille et des capsules polaires. En outre, la cytotoxicité et les médiateurs inflammatoires, tels que NO, PGE2, iNOS et COX-2, sont restés inchangés dans les cellules Caco-2 après exposition à des spores naïves et chauffées par rapport aux témoins positifs. Collectivement, les résultats de cette étude impliquent que les spores du génotype ST3 de K. septempunctata ne provoquent pas d’inflammation dans les cellules Caco-2.