Mémoire

Pediatric visceral leishmaniasis diagnosis in Tunisia: comparative study between optimised PCR assays and parasitological methods

Diagnostic de la leishmaniose viscérale de l’enfant en Tunisie : comparaison de deux méthodes PCR optimisées aux méthodes classiques

¹ Laboratoire de Parasitologie-Mycologie (99-UR/08-05), Hôpital La Rabta, 1007 Tunis, Tunisia
² Laboratoire d’hématologie, Hôpital d’enfants de Tunis, Tunisia
³ Service de Parasitologie (99-UR/08-05), Faculté de Pharmacie de Monastir, Tunisia

^* Correspondence: Emna Chaker. Tel.: / Fax: + 216 71 57 10 48. E-mail: emna.chaker@rns.tn

Received: 24 May 2007
Accepted: 16 January 2008

Abstract

There has been a steady increase of visceral leishmaniasis during the past 20 years in Tunisia. In this study, we assess the value of two optimised PCR versus those of classical methods for the diagnosis of human visceral leishmaniasis. 106 samples were collected from 53 cases of pediatric visceral leishmaniasis. Peripheral blood and bone marrow samples were analysed both by parasitological methods (direct examination, leukocytoconcentration (LCC) and culture) and by PCR methods with two primer pair (R221/R332 and Lei 70L/Lei 70R). We diagnosed visceral leishmaniasis in all patients: 44 cases were diagnosed by culture (83%), 42 by direct examination of bone marrow (79%), 17 by LCC (32%), and 53 positive cases with both PCR assays (R221/R332 and/or Lei 70L/Lei 70R) (100%). Regarding each PCR assay, for blood samples, the difference between the sensitivities of PCR Lei 70L/Lei 70R (86,8%) and PCR R221/R332 (17%) is statistically significant with p-value 0.025. For bone marrow, the sensitivities of the two PCR methods were respectively 96,2% (Lei 70L/Lei 70R) and 75,5% (R221/R332). On the whole, PCR Lei 70L/Lei 70R was more effective than PCR R221/R332 and conventional methods for the two biological samples. Moreover, the requirement of less invasive sample using blood has the advantage of being repeatable for screening and for post therapeutic monitoring.

Résumé

L’incidence de la leishmaniose viscérale en Tunisie est de plus en plus importante depuis la recrudescence des cas rapportés au cours de ces 20 dernières années. Pour une meilleure approche diagnostique, nous nous proposons d’appliquer deux méthodes PCR optimisées dans le diagnostic de la leishmaniose viscérale et de les comparer aux méthodes classiques. 106 échantillons ont été collectés chez 53 enfants hospitalisés atteints de leishmaniose viscérale. Sang périphérique et moelle osseuse ont été analysés par les méthodes parasitologiques (examen direct, leucocytoconcentration (LCC) et culture) et par les méthodes PCR moyennant deux couples d’amorces (R221/R332 et Lei70L/Lei70R). Tous les patients étaient atteints de la leishmaniose viscérale : 44 cas ont été diagnostiqués par la culture (83 %), 42 par l’examen direct de la moelle osseuse (79 %), 17 par la LCC (32 %) et 53 par les deux méthodes PCR (R221/R332 et/ou Lei70L/Lei70R) (100 %). En s’intéressant aux méthodes PCR, la sensibilité de la PCR Lei70L/Lei70R dans le sang périphérique est significativement plus élevée que celle de la PCR R221/R332 (respectivement 86,8 % et 17 % ; p = 0,025). Pour les prélèvements de la moelle osseuse, les sensibilités des deux méthodes PCR sont respectivement 96,2 % (Lei70L/Lei70R) et 75,5 % (R221/R332). Ainsi, la PCR Lei70L/Lei70R est plus efficiente que la PCR R221/R332 et les méthodes classiques et ce, pour les deux sites de prélèvements. De plus, nous avons pu relever l’apport considérable du prélèvement du sang périphérique vu son caractère peu invasif et sa facilité de réalisation pour le diagnostic et le suivi post-thérapeutique.