Note de recherche

Inhibition of the DNA amplification of trypanosomes present in tsetse flies midguts: implications for the identification of trypanosome species in wild tsetse flies

Inhibition de l’amplification de l'ADN de trypanosomes présents dans le tube digestif de mouches tsétsé : implication pour l’identification des espèces de trypanosomes chez les glossines sur le terrain

Laboratoire de Recherche et de Coordination sur les Trypanosomoses, UR035 IRD-CIRAD, Programme Santé Animale, TA 207/G, Campus International de Baillarguet, 34398 Montpellier Cedex 5, France.

^* Correspondence : Dr. S. Ravel. Tel.:33 (0)4 67 59 39 20 - Fax : 33 (0)4 67 59 39 20. E-mail: ravel@mpl.ird.fr

Received: 16 November 2002
Accepted: 24 September 2003

Abstract

The present study was carried out in order to investigate if there was really a failure of PCR in identifying parasitologically positive tsetse flies in the field. Tsetse flies (Glossina palpalis gambiensis and Glossina morsitans morsitans) were therefore experimentally infected with two different species of Trypanosoma (Trypanosoma brucei gambiense or Trypanosoma congolense). A total of 152 tsetse flies were dissected, and organs of each fly (midgut, proboscis or salivary glands) were examined. The positive organs were then analysed using PCR. Results showed that, regardless of the trypanosome species, PCR failed to amplify 40 % of the parasitologically positive midguts. This failure, which does not occur with diluted samples, is likely to be caused by an inhibition of the amplification reaction. This finding has important implications for the detection and the identification of trypanosome species in wild tsetse flies.

Résumé

La présente étude a été conduite dans le but de vérifier si l'échec de la PCR pour identifier les mouches tsétsé porteuses de trypanosomes sur le terrain était du à une inhibition de la réaction d'amplification ou bien à l'absence d'amorces spécifiques de certaines souches de trypanosomes. Pour ce faire, des infections expérimentales de glossines (Glossina palpalis gambiensis et Glossina morsitans morsitans) avec deux espèces différentes de trypanosomes (Trypanosoma brucei gambiense ou Trypanosoma congolense) ont été réalisées. 152 glossines ont été disséquées et les organes de chaque mouche (Intestin, proboscis ou glandes salivaires) ont été examinés. Les organes positifs ont ensuite été analysés par PCR. Les résultats montrent que, quelle que soit l'espèce de trypanosomes, 40 % des intestins positifs à l'observation ne sont pas amplifiés par la PCR. Ce problème, résolu en diluant les échantillons, est probablement dû à l'inhibition de la réaction d'amplification. Ceci a d'importantes implications pour la détection et l'identification des espèces de trypanosomes chez les glossines sur le terrain.