Mémoire

Comparison of cholinesterase activities in the excretion-secretion products of Trichinella pseudospiralis and Trichinella spiralis muscle larvae

Comparaison des activités cholinestérasiques des produits d'excrétion-sécrétion des larves au stade intramusculaire de Trichinella pseudospiralis et Trichinella spiralis

Laboratory of Parasitology, Dpt. Microbiology and Parasitology, Faculty of Pharmacy, University of Alcalá, Crtra. Madrid-Barcelona km 33, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, Spain.

^* Correspondence : Rosa María Ros-Moreno. Tel.:33 (0)5 55 43 58 33 - Fax : 33 (0)5 55 43 58 93. E-mail : mpcas@microb.alcala.es

Received: 6 June 2001
Accepted: 20 November 2001

Abstract

The presence of cholinesterases (ChE) is reported in T. pseudospiralis excretion-secretion products (ESP) by spectrophotometry method, using acetylthiocholine (ATCI) and butyrilthiocholine (BTCI) as substrates. By inhibition assays, we found that T. pseudospiralis release both acetyl- and butiryl-cholinesterases (AchE and BchE, respectively). The sedimentation coefficientes of these enzymes were determined by sucrose density gradient. We studied the in vivo ChE secretion by immunoblot assays using AchE from Electrophorus (electric eel) and sera from normal or infected mice with T. pseudospiralis or T. spiralis. The presence of anti-AchE antibodies was only demonstrated in the sera from T. pseudospiralis infected mice. Moreover the in vivo secretion was corroborated by the high difference determinate between the ChE activity of the immuno complexes from T. pseudospiralis infected sera and the immunocomplexes from T. spiralis infected sera as well as normal sera. Finally, we analyzed the effect of the organophosphate Neguvón^R (metrifonate) on the ChE activity from the J. pseudospiralis ESP. The drug inhibits in part this activity. Moreover Neguvón^R (metrifonate) showed a high activity against the T. pseudospiralis viability.

Résumé

La présence de cholinestérases (ChE) est mise en évidence au niveau des produits d'excrétion-sécrétion de T. pseudospiralis en spectrophotométrie utilisant l'acétyl-thiocholine et la butyrilthiocholine en tant que substrats. Avec le test d'inhibition, l'on observe que T. pseudospiralis libère à la fois de l'acétyl-et de la butiryl-cholinestérase. Les coefficients de sédimentation de ces enzymes ont été déterminés par gradient de densité de sucrose. L'étude in vitro de la sécrétion de ChE a été effectuée par immunoblot utilisant de l'acélyl-cholinestérase d'Electrophorus (anguille électrique) et de sérums de souris saines ou infectées par T. pseudospiralis et T. spiralis. L'existence d'anticorps anti acétyl-cholinestérase n'est démontrée que dans le sérum de souris infectées par T. pseudospiralis. De plus, in vivo, la sécrétion est confirmée par la grande différence observée entre l'activité ChE des immuns complexes des sérums infectés par T. pseudospiralis et celle de ceux infectés ou non par T. spiralis. Enfin, il a été étudié l'effet du métrifonate (organophosphate) sur l'activité ChE des produits d'excrétion-sécrétion de T. pseudospiralis. Ce produit inhibe en partie cette activité. De plus, le métrifonate a un important effet sur la viabilité de T. pseudospiralis.