Mémoire

No evidence of oxidant events in amphotericin B cytotoxicity versus L. infantum promastigotes

Cytotoxicité de l'amphotéricine B sur la forme promastigote de L. infantum : aucune preuve de l'intervention de phénomènes oxydants

Laboratoire de Parasitologie, Faculté de Pharmacie, 27, boulevard Jean Moulin, 13385 Marseille cedex 05, France.

^* Correspondence : Dr N. Azas. Tel. : 33 (0)4 91 83 55 44. e-mail : Nadine.Azas@pharmacie.univ-mrs.fr

Received: 10 April 2001
Accepted: 2 June 2001

Abstract

Amphotericin B is used for the treatment of systemic mycoses and visceral leishmaniasis. The objective of our study was to evaluate the impact of catalase, ascorbic acid and ketoconazole on the amphotericin B toxicity towards Leishmania promastigotes membrane by two flow cytometric tests, the membrane potential assay using a cationic dye, [DiOC₅ (3)], and the membrane permeability test using propidium iodide. The collapse of membrane potential appeared at amphotericin B concentrations weaker than those assessed by the membrane permeability test. The binding of amphotericin B to membrane sterol was not modified by catalase or ascorbic acid whereas amphotericin B-induced growth inhibition could be modulated by these products. The permeabilizing effect of amphotericin B on parasite membrane was strongly reduced in the presence of ketoconazole. These results confirmed the pore hypothesis of amphotericin B action and suggested that flow cytometric methods constituted a valuable alternative to conventional methods for assessing the effect of drugs on cellular membrane and evaluating parasite susceptibility to polyene antibiotics.

Résumé

L'amphotericine B est utilisée pour le traitement des mycoses systémiques et des leishmanioses viscérales. L'objectif de notre étude était d'évaluer l'impact de la catalase, de l'acide ascorbique et du kétoconazole sur la toxicité membranaire de l'amphotéricine B envers les formes promastigotes de Leishmania par deux test de cytométrie en flux, le test du potentiel de membrane utilisant un marqueur cationique, le [DiOC₅ (3)], et le test de la perméabilité membranaire basé sur l'utilisation de l'iodure de propidium. La diminution du potentiel de membrane est apparue pour des concentrations d'amphotéricine B plus faibles que celles déterminées par le test de perméabilité membranaire. La fixation de l'amphotéricine B aux stérols membranaires n'a pas été modifiée ni par la catalase ni par l'acide ascorbique alors que son activité anti-proliférative pourrait être modifiée par ces produits. L'effet perméabilisant de l'amphotéricine B sur la membrane parasitaire a été fortement réduit en présence de kétoconazole. Ces résultats ont confirmé que la formation de pores membranaires consituaient le principal mécanisme dans faction létale de l'amphotéricine B. Ainsi, les méthodes de cytométrie en flux constituent une alternative intéressante aux méthodes conventionnelles pour l'évaluation de l'effet de drogues sur la membrane cellulaire et pour l'évaluation de la sensibilité des parasites aux antibiotiques polyéniques.