Note de recherche

Preliminary analysis of the proteolytic enzymes in the excretory-secretory products of the adult stages of the dog hookworm Uncinaria stenocephala

Étude préliminaire des caractéristiques des protéases présentes dans les produits d'excrétion-sécrétion d’Uncinaria stenocephala adulte

Department of Parasitology, Faculty of Veterinary Medicine, Warsaw Agricultural University, Grochowska 272, 03-849 Warsaw, Poland.

^* Correspondence : H. Wedrychowicz. Tel/Fax : +48 22 810 18 51. E-mail: Wedrychowicz@alpha.SGGW.waw.pl

Received: 10 April 2000
Accepted: 21 September 2000

Abstract

The paper describes an introductory characterisation of proteinases present in the excretory-secretory products (ESP) of adult Uncinaria stenocephala. In SDS-PAGE gelatine substrate gels ESP resolved as a six bands of proteolytic activity, with a molecular weight of 182, 159 , 98 , 50 , 39 and 26 kDa. The 98 and 39 kDa components were serine proteinases. The 50 kDa band was sensitive to a metalloproteinase inhibitor. The 26 kDa component was highly sensitive to cysteine proteinase inhibitors and was also partially inhibited in the presence of EDTA. The bands of 182 and 159 kDa were sensitive to a Zn-metalloproteinase inhibitor.

The enzymes present in ESP showed the highest proteolytic activity at pH 8-9. Quantitative analysis revealed maximum proteolytic activity of the polypeptides of 159 and 182 kDa at pH 7; 98 and 26 kDa at pH 8 while the 50 kDa and 39 kDa components showed the highest activity at pH 9.

Résumé

Uncinaria stenocephala est un parasite des canidés appartenant à la famille des ankylostomes. On ignore toujours la composition et la fonction des produits d'excrétion-sécrétion (ESP). Cet essai démontre les caractéristiques préliminaires des proteases présentes dans les ESP d'U. stenocephala adulte.

En utilisant la méthode de l'électrophorèse SDS-PAGE, on a découvert six protéines présentant des activités protéolytiques différenciées, de masse moléculaire : 182. 159, 98, 50, 39 et 26 kDa dans le gel-substrat, les épreuves avec les inhibiteurs spécifiques des proteases ont démontré que les composants de masse 98 et 39 kDa appartiennent aux proteases à serine, ta bande 50 kDa a des propriétés de métalloprotéase. la bande 26 kDa démontre des caractères de protease à cysteine. Les composants 182 et 159 semblent être des métalloprotéases à zinc. Les enzymes découvertes dans les ESP montrent une plus grande activité à pH 8-9.