Note de recherche

Cloning and expression of isocitrate lyase from human round worm Strongyloides stercoralis

Clonage et expression de l'isocitrate lyase de Strongyloides stercoralis

¹ Department of Internal Medicine, James H. Quillen College of Medicine, East Tennessee State University, Johnson City TN, .
² James H. Quillen Veterans Affair Medical Center, Mountain Home TN, .

^* Correspondence: Afzal A. Siddiqui. Department of Internal Medicine, James H. Quillen College of Medicine, Box 70622, East Tennessee State University, Johnson City, TN 37614. Tel. : (423) 439-6376 - Fax : (423) 439-6387. E-mail : siddiqui@etsu.edu

Received: 25 April 2000
Accepted: 22 June 2000

Abstract

A full length cDNA (1463 bp) encoding isocitrate lyase (EC 4.1.3.1) of Strongyloides stercoralis is described. The nucleotide sequence of this insert identified a cDNA coding for the isocitrate lyase. The conceptually translated amino acid sequence of the open reading frame for S. stercoralis isocitrate lyase encodes a 450 amino acid residue protein with an apparent molecular weight of 50 kDa and a predicted pl of 6.39. The sequence is 69 % A/T, reflecting a characteristic A/T codon bias of S. stercoralis. The amino acid sequence of S. stercoralis isocitrate lyase is compared with bifunctional glyoxylate cycle protein of Caenorhabditis elegans and isocitrate lyases from Chlamydomonas reinhardtii and Myxococcus xanthus. The full length cDNA of S. stercoralis was expressed in pRSET vector and bacteriophage T7 promoter based expression system. S. stercoralis lyase recombinant protein, purified via immobilized metal affinity chromatography, showed a molecular mass of 50 kDa on polyacrylamide gels. The role of isocitrate lyase in the glyoxylate cycle and energy metabolism of S. stercoralis is also discussed.

Résumé

Un ADN recombinant complet codant pour l'isocitrate lyase (EC 4.1.3.1.) de Strongyloides stercoralis a été déterminé. La lecture de cette séquence donne une protéine de 450 acides aminés avec un poids moléculaire apparent de 50 kDa et un pl calculé de 6.39. Cette séquence possède un rapport A/T de 69 % caractéristique du rapport A/T de S. stercoralis. La séquence d'acides amminés de cette isocitrate lyase est comparée avec celle de la protéine du cycle fonctionnel du glyoxal de Coenorhabditis elegans et des isocitrates lyases de Chlamydomonas reinhardtii et Myxococcus xanthus. La totalité de cet ADN recombinant a été exprimée à l'aide d'un vecteur pRSET et du système d'expression du bactériophage T7. La protéine recombinante de S. stercoralis a été purifiée par chromatographie d'affinité sur métal et a présenté une masse moléculaire de 50 kDa en gel de polyacrylamide. L'importance de l'isocitrate lyase dans le cycle du glyoxal et dans le métabolisme de S. stercoralis est discutée.