Mémoire

A universally applicable internal standard for PCR detection of Wuchereria bancrofti in biological samples

Un standard interne universel pour la détection par PCR de Wuchereria bancrofti dans les échantillons biologiques

Institut Territorial de Recherches Médicales Louis Malardé, BP 30, Papeete, Tahiti, French Polynesia.

^* Correspondence: Dr. Luc Nicolas, Institut Pasteur, Unité d'lmmu-nophysiologie Cellulaire, 25, rue du Dr Roux, 75724 Paris Cedex 15, France. Tel : (33) 1 4568 8170 — Fax : (33) 1 4061 3169. Email : lnicolas@pasteur.fr.

Received: 22 March 1997
Accepted: 9 June 1997

Abstract

A PCR-based assay have been previously described to detect Wuchereria bancrofti in mosquitoes and in human blood samples. However, the efficiency of PCR amplification may vary between samples depending on the presence of PCR Inhibitors, leading sometimes to false negative results. To overcome this drawback, an internal standard plasmid (pWB 11) was constructed. It can be added to each PCR reaction for coamplification along with the target W. bancrofti DNA (Sspl DNA repeat) using the same pair of primers. PCR products from W. bancrofti DNA or from pWB 11 are 34 bp different in size and can be visualized either on agarose gel or by DNA ELISA using two different oligonucleotides probes.

Résumé

Un test d'amplification génique (PCR) pour détecter Wuchereria bancrofti dans les moustiques et le sang humain a été précédemment décrit. L'efficacité de la réaction de PCR peut cependant varier d'un échantillon à l'autre, en raison de la présence d'inhibiteurs de PCR, entraînant parfois des faux-négatifs. Un plasmide (pWB 11), qui sert de standard interne de PCR, a été construit par clonage de la séquence d'ADN répété cible de W. bancrofti et insertion de 34 pb par mutagénèse. La séquence clonée dans le plasmide peut être coamplifiée avec la séquence cible de W. bancrofti, en utilisant les mêmes amorces. Les deux produits PCR peuvent être détectés soit par électrophorèse en gel d'agarose, soit par ADN-ELISA en utilisant deux sondes nucléotidiques spécifiques de chaque produit.