Mémoire

Development of a protein-free chemically defined culture medium for the propagation of the oyster pathogen Perkinsus marinus

Développement d'un milieu de culture sans protéine et de composition définie pour la propagation d'un pathogène d'huître, Perkinsus marinus (Apicomplexa)

School of Marine Science, Virginia Institute of Marine Science, College of William and Mary, Gloucester Point, Virginia 23062.

^* Correspondence: Dr. Jerome La Peyre. Tel :(804) 642-7231 - Fax : (804) 642-7186 - E-mail : jlap@vims.edu

Received: 6 May 1996
Accepted: 9 October 1996

Abstract

In the present study we describe a protein-free, chemically definec culture medium, designated JL-ODRP-3, which supports the propagation of Perkinsus marinus, a parasite of the eastern oyster, Crassostrea virginica. P. marinus adapted rapidly to the defined medium and the growth rate of the protozoan increased significantly following a few subcultures. Two isolates of P. marinus, one from the Chesapeake Bay (Virginia) and the other from the Gulf of Mexico (Texas| were cultuted for at least ten passes. The doubling times for the isolates from Virginia and Texas, in log phase, were 18 ± 1.2 and 28.6 ± 3.2 hours respectively, after ten passes in JL-ODRP-3. Moreover, P. marinus cells cultured in the defined medium were infective to eastern oysters. Finally, the defined medium was used successfully to initiate continuous cultures of P. marinus from heart fragments of infected oysters. The absence of proteins and peptides from this chemically defined medium demarcates JL-ODRP-3 as the most suitable medium to study P. marinus proteins, to produce antigens for antibody production, and to screen chemotherapeutic agents.

Résumé

Dans cette étude, nous avons décrit un milieu de culture, désigné JL-ODRP-3, sans protéine et dont la composition est définie, qui permet la propagation de Perkinsus marinus, un parasite de l'huître américaine, Crassostrea virginica. Perkinsus marinus s'est adapté rapidement à ce milieu de culture défini et le taux de prolifération de ce protozoaire a augmenté d'une manière significative suite à quelques sous-cultures. Deux isolats de P. marinus, l'un de la baie de Chesapeake (Virginie) et l'autre du golfe du Mexique (Texas) ont été cultivés et repiqués au moins dix fois en sous-culture. Les temps de générations pour les isolats de Virginie et du Texas, en croissance logarithmique, étaient de 18 ± 1,2 et de 28,6 ± 3,2 heures respectivement, après dix passages dans le milieu de culture JL-ODRP-3. Des cellules de P. marinus cultivées dans le milieu défini étaient capable d'infecter des huîtres américaines. Finalement, le milieu défini a été utilisé pour l'initiation de cultures continues de P. marinus à partir de fragments de coeurs d'huîtres infectées. L'absence de protéines et de peptides dans ce milieu défini présente JL-ODRP-3 comme le milieu le plus propice à l'étude des protéines de P. marinus, à la production d'antigènes pour la création d'anticorps, et à la détection d'effets d'agents chémothérapeutiques