Mémoire

Purification of a fraction of Giardia lamblia trophozoite extract associated with disaccharidase deficiencies in immune Mongolian gerbils (Meriones unguiculatus)

Purification d'une fraction de trophozoïtes de Giardia lamblia liée à une diminution de l’activité des disaccharidases chez le Mérion (Meriones unguiculatus) immunisé

Institute of Parasitology of McGill University, Macdonald Campus, 21,111 Lakeshore Road, Ste. Anne de Bellevue, Québec, CanadaH9X 3V9.

^* Correspondence : Dr. G. M. Faubert, Tel. : (514) 398-7724 - Fax : (514) 398-7857. E-mail: GAETAN@PARASIT.LAN.McGILL.CA.

Accepted: 21 December 1994

Abstract

The effects on disaccharidase activities of challenging gerbils previously exposed to Giardia lamblia with fradions of the crude trophozoite extract were examined. Gel filtration of the soluble extract on a Sephacryl S-200 HR column resulted in 3 fradions : F1, F2 and F3. Only a challenge with fraction F1 (0.1 mg total dose) was found to induce disaccharidase deficiencies. Boiling F1 prior to challenge did not change this effect on the enzyme activities. However, the decreases were nol obtained when the total F1 dose was reduced to 0.05 mg. Column chromatography of fraction F1 under dissociating and reducing conditions resulted in 2 further fractions : F1a and F1b. Challenging immune gerbils with F1b led to impairments of disaccharidase activity similar to those obtained with F1. Protein analysis of the crude extract, as well as the fractions of the extract, revealed several high and low molecular weight bands. These findings indicate that a constituent(s) of fraction F1b is the portion of the parasite which induces disaccharidase deficiencies in immune gerbils. This fraction consists of proteins ranging in molecular weight from 32 to 200 kDa. In addilion the G. lamblia fraction involved in Ihe decreases in enzyme activity is heat-stable.

Résumé

Les effets de l'inoculation de fractions de trophozoïtes de Giardia lamblia sur les activités disaccharidasiques chez les gerboises mongoliennes précédemment infectées avec G. lamblia ont été étudiés. La filtration sur gel Sephacryl S-200 HR a produit 3 fractions : F1, F2 et F3. La fraction F1 est la seule qui ait réduit l'activité des disaccharidases lors d'une dose de rappel (de 0, 1 mg). la fraction F1, amenée à son point d‘ébullition, conserve son effet négatif sur l'activité des enzymes. Toutefois, l'activité enzymatique n’est plus affectée par F1 lorsque celle-ci est réduite jusqu'à 0,05 mg. La chromatographie sur colonne de la fraction F1 dans des conditions de dissociation et de réduction a mené à 2 autres fractions : F1a et F1b. Utilisée en dose de rappel chez les gerboises précédemment infectées, la fraction F1b a produit des effets similaires à ceux de F1 sur l'activité des enzymes. L'onalyse protéique de l'extrait complet des trophozoites et des fractions obtenues par chromatographie révèle plusieurs bandes de poids moléculaires variés. Ces résultats indiquent que la fraction de Giardia responsable de la déficience de l'activité des disacchanidases est localisée dans la fraction F1b. Le poids moléculaire des protéines de cette fraction varie de 32 à 200 kDa. De plus, la fraction de G. lamblia qui est liée à la diminution des activités disaccharidasiques est stable à la chaleur.