Mémoire

Conservation aux basses températures de Toxoplasma gondii Nicolle et Manceaux, 1909 - Action du diméthyl-sulfoxyde -

II. — Étude cytologique du parasite congelé avec ou sans substances protectrices

Institut Pasteur, Laboratoire des Rickettsioses 28, rue du Docteur-Roux, B.P. 520, F 75724 Paris Cedex 15, France.

Résumé

Quelles sont les lésions morphologiques dues à la congélation de Toxoplasma gondii et quel est l’aspect d’un toxoplasme protégé par le DMSO ?

L’observation au microscope à immersion des toxoplasmes donne des résultats succincts n’expliquant pas des résultats aussi radicalement différents que la survie ou la mort des parasites. A l’état frais en contraste de phase, l’exsudat péritonéal de souris toxoplasmique, observé lors de mauvaises conservations, montre une vacuolisation du cytoplasme, l’effacement des contours de la membrane et du noyau. Des aspects normaux ou proches de la normale sont obtenus avec 5 ou 10 p. 100 de DMSO ajoutés à de l’exsudat dilué au 1/10. Après fixation, seule la coloration de May-Grünwald-Giemsa peut s’appliquer valablement sur ce matériel ; lors de conservation défavorable (en l’absence ou avec du DMSO introduit dans de l’exsudat non dilué) on voit des parasites gonflés, au cytoplasme pâle et même diffus, une substance nucléaire hétérogène. Les colorations de Feulgen et de May-Grünwald- Giemsa sur des toxoplasmes cultivés en cellules en culture mettent en évidence des lésions importantes du noyau avec des congélations défectueuses.

La microscopie électronique en pénétrant jusqu’à la structure fine pouvait mettre en lumière des lésions plus infimes et peut-être plus vitales du toxoplasme. En l’absence de DMSO, on constate des lésions profondes du cytoplasme, du noyau et de leurs structures, mais une bonne conservation de l’architecture rigide du parasite. Avec 5 p. 100 de DMSO, on observe des lésions, en particulier la vacuolisation du cytoplasme et c’est avec 10 p. 100 de DMSO qu’on obtient des aspects révélant de bonnes conservations.

Abstract

What is the morphological damage attributable to freezing Toxoplasma gondii and what is the state of Toxoplasma protected by DMSO ?

By immersion microscopy, we obtained broad results which did no show radical differences between surviving and dying parasites. When observed in the living state by phase contrast, the peritoneal exudate of toxoplasmic mice, observed during incorrect preservation, shows cytoplasmic vacuolisation and disappearance of the cell and nucleus walls. Normal or near normal results are obtained with 5 % or 10 % of DMSO added to the exudate diluted to 1/10. After fixation, only May-Grünwald-Giemsa staining can be properly used on this material and with incorrect preservation (without or with DMSO added to the undiluted exudate) distended parasites having faint cytoplasma even with shadowy outlines and a heterogeneous nuclear substance can be seen. Under the same conditions, Feulgen and May-Grünwald-Giemsa staining, on Toxoplasma growing in cell culture clearly shows intensive damage to the nucleus with defective freezing.

Using the electron microscope down to fine structure, we observed minute and perhaps more serious damage of Toxoplasma. Without DMSO we observed more intensive damage of cytoplasma and nucleus and of their structures, but a good preservation of the hard framework of the parasite. With 5 % DMSO, there was still damage, in particular vacuolisation of the cytoplasma and it is only with 10 % DMSO that results showing good preservation are obtained.